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豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒
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豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒

上海優(yōu)選生物
YX-23199P
現(xiàn)貨優(yōu)惠
48T

豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒

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  • 品牌:上海優(yōu)選生物
  • 貨號:YX-23199P
  • 種屬齊全:現(xiàn)貨優(yōu)惠
  • 規(guī)格:48T
商品描述

豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒



 豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒 




檢測原理;

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被血清鐵蛋白(SF)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清鐵蛋白(SF)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。



樣品收集、處理及保存方法;

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。


自備物品;

1.酶標儀(450nm)

2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱


操作注意事項;

1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。

2.   實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

3.   按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.   所有液體組分使用前充分搖勻。


豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒組成;



豬血清鐵蛋白(SF)ELISA試劑盒組成名稱

96孔配制

48孔配制

備注

微孔酶標板

12*8

12*4

標準品

0.3ml*6

0.3ml*6

樣本稀釋液

6ml

3ml

檢測行體-HRP

10ml

5ml

20*洗滌緩沖液

25ml

15ml

按照說明書進行稀釋

底物A

6ml

3ml

底物B

6ml

3ml

終止液

6ml

3ml

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、7.5、15、30、60、120 ng/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。



操作步驟;

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的競爭抗原50μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。


結(jié)果判斷;

 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應(yīng)OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性:標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:最低檢測濃度小于1.0 ng/mL。

3.  檢測范圍:1.0-120 ng/mL。

4.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

5.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

6.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

7.  有效期:6個月

免責(zé)聲明;

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負責(zé)。

  嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。


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